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TRAVAIL PRATIQUE.

ELECTROPHORESE ET ETUDE DE LA DIVERSITE GENETIQUE DU PALMIER DATTIER (Phoenix dactylifera L.) A L'AIDE DU POLYMORPHISME ISOENZYMATIQUE

 

TP. Fichier pdf

1/ ELECTROPHORESE. TECHNIQUE DE SEPARATION SELON LA CHARGE ELECTRIQUE ET LA TAILLE DES MOLECULES

L'électrophorèse des enzymes extraites de feuilles de palmier dattier, est réalisée dans des conditions non dénaturantes. Tout chaffage du système est éliminé par refroidissement continu assuré par un cryostat.

Recherche rapide ciblée thématique dans sites web de l'auteur:


Le principe de l'electrophorèse et le détail de la technique peuvent être revus en vistant le lien correspondant.

2/ ECHANTILLONAGE, EXTRACTION DES ENZYMES, PREPARATION DE GELS DE POLYACRYLAMIDE POUR ELECTROPHORESE

Afin de pouvoir interpréter les résultats à l'échelle de la génétique des population, l'échantillonnage doit concerner un nombre élevé de palmiers. Le matériel doit être aussi varié que possible pour couvrir toute la diversité de l'espèce.

EXTRACTION ET REVELATION DES ISOENZYMES SEPAREES PAR ELECTROPHORESE SUR GEL DE POLYACRYLAMIDE (Video: Extraction des enzymes (homogéneisation et centrifugation, Révélation des isoenzymes après électrophorèse dans des conditions non dénaturantes)

ELECTROPHORESE NON DENATURANTE SUR GEL DE POLYACRYLAMIDE (Video: Préparation du support de migration constitué par le gel de polyacrylamide (11%, avec un gel de concentration à 5%), Dépôt des échantillons, Lancement de l'électrophorèse)

3/ ELECTROPHORESE

L'électrophorèse est réalisée sur un gel de polyacrylamide de concentration 11%. Le support de migration est préparé avant l'électrophorèse en confectionnant un moule à l'aide de deux plaques de verres séparées l'une sur l'autre par des bandes plastiques d'épaisseur 1 mm.

Lorsque le gel sont prêts, les extraits enzymatiques préalablement préparés à partir des feuilles de palmier dattier, seront déposés sur le gel pour être séparés.

...

4/ REVELATION DES ISOENZYMES ET INTERPRETATION DES ZYMOGRAMMES

Une fois l'électrophorèse est terminée, les gels (ici 2) sont révélés pour les enzymes choisies. Ici, deux enzymes (une enzyme par gel) sont révélées in situ; l'Endopeptidase (ENP) et la Glutamate Oxaloacétate Transaminase (GOT).

INTERPRETATION DES DONNEES

INVENTAIRE DES GENOTYPES POUR LES LOCI Enp ET Got-2

 

1/ En considérant les deux exemples de zymogramme par enzyme, préciser le nombre de zones de migration des isoenzymes des ENP et de la GOT. Ceci permet d'avoir une idée sur le nombre de loci qui codent pour ces enzymes (voir cours). Caractériser les zones par la valeur moyenne de leurs Rf (mobilité relative).

2/ Pour chaque locus (ou zone de migration), déterminer le nombre maximum de bandes. Sachant que le nombre de bandes le plus élevé se trouve chez les hydrides (héterozygotes), préciser la nature de l'enzyme (structure quaternaire = nombre de sous-unités) codée par locus (voir le cours).

3/ Pour chaque zone (ou locus), préciser sur combien de niveaux de migration se répartissent les différentes bandes ?. Ceci permet d'avoir une idée sur le nombres d'allèles par locus, lorsque l'enzyme est monomérique.

4/ Lorsque vous aurez déterminé le nombre de loci et la nature de l'enzyme exprimée, donner l'inventaire de tous les génotypes présentés par les zymogrammes des ENP et de la GOT.VOIR: LA FICHE D'ORGANISATION DU TP

TEST DE CONFORMITE GENETIQUE DE VITRO-PLANTS DE PALMIER DATTIER

Selon ce zymogramme de la GOT, que peut-on dir de la conformité génétique de ce lot de 20 vitro-plants de palmier dattier issus issu de la culture in vitro (organogenèse) ?.

PREDICTION DES PARENTS DE POPULATIONS F1 DE PALMIER DATTIER

Selon ce zymogramme de la GOT des feuilles de 20 jeunes plants de palmier dattiers issus d'un croisement dirigé, peut on prédir les génotypes des parents mêle et femelle qui ont été utilisés dans le croisement ?.

VOIR: LA FICHE D'ORGANISATION DU TP

ALLER AUX: TD / COURS

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